ASTM E2186-02a(2016)
Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet

Стандартный №

ASTM E2186-02a(2016)

Дата публикации

2002

Разместил

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Последняя версия

ASTM E2186-02a(2016)

сфера применения

5.1. Общим результатом клеточного стресса является увеличение повреждений ДНК. Повреждение ДНК может проявляться в форме изменений оснований, образования аддуктов, разрывов цепей и поперечных связей (19). Разрывы нитей могут возникать разными способами: непосредственно генотоксичными соединениями, посредством индукции апоптоза или некроза, вторично за счет взаимодействия с кислородными радикалами или другими реактивными промежуточными соединениями или как следствие ферментов эксцизионной репарации (20-22). Помимо связи с раком, исследования показали, что увеличение повреждения клеточной ДНК предшествует или соответствует замедлению роста, аномальному развитию и снижению выживаемости взрослых особей, эмбрионов и личинок (16, 23, 24). 5.1.1. Анализ Comet можно легко использовать для сбора данных о разрыве цепи ДНК (9, 25, 26). Это простой, быстрый и чувствительный метод, позволяющий сравнивать повреждения цепей ДНК в различных популяциях клеток. Как представлено в этом руководстве, анализ облегчает обнаружение однонитевых разрывов ДНК и щелочных лабильных участков в отдельных клетках и позволяет определить их распространенность по сравнению с контрольными или эталонными клетками (9, 16, 26). Анализ предлагает ряд преимуществ; измеряется повреждение ДНК в отдельных клетках, для проведения анализа необходимо отобрать лишь очень небольшое количество клеток (<108201;000), анализ можно проводить практически на любом типе эукариотических клеток, и это было показано в сравнительные исследования являются очень чувствительным методом обнаружения повреждений ДНК (2, 27). 5.1.2 Это общие рекомендации. Существует множество процедурных вариантов этого анализа. Используемый вариант зависит от типа исследуемых клеток, типов интересующих повреждений ДНК, а также возможностей визуализации и анализа лаборатории, проводящей анализ. Для визуализации ДНК ее окрашивают флуоресцентным красителем или для анализа с помощью светового микроскопа ДНК можно окрасить серебром (28). В этом руководстве будут описаны только методы флуоресцентного окрашивания. Микроскопическое определение миграции ДНК может быть выполнено либо на глаз с помощью окулярного микрометра, либо с использованием программного обеспечения для анализа изображений. Оценку на глаз можно проводить с помощью калиброванного окуляр-микрометра или путем разделения клеток на четыре-пять классов в зависимости от степени миграции (29, 30). Системы анализа изображений состоят из ПЗС-камеры, прикрепленной к флуоресцентному микроскопу, а также программного и аппаратного обеспечения, разработанного специально для захвата и анализа изображений флуоресцентно окрашенных ядер. Использование успеха......

ASTM E2186-02a(2016) Ссылочный документ

• ASTM E1706 Стандартный метод испытаний для измерения токсичности загрязнителей, связанных с отложениями, для пресноводных беспозвоночных
• ASTM E1847 Стандартная практика статистического анализа испытаний на токсичность, проводимых в соответствии с рекомендациями ASTM

ASTM E2186-02a(2016) История

• 2002 ASTM E2186-02a(2016) Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
• 2002 ASTM E2186-02a(2010) Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
• 2002 ASTM E2186-02a Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
• 2002 ASTM E2186-02 Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet