1.1 В данном руководстве описаны рекомендуемые критерии проведения анализа гель-электрофореза одиночных клеток (SCG) или анализа Comet для измерения однонитевых разрывов ДНК в эукариотических клетках. Анализ Comet — очень чувствительный метод обнаружения разрывов цепей ДНК отдельных клеток. Большинство исследований с использованием анализа Comet были сосредоточены на медицинском применении и поэтому изучали повреждение ДНК в клетках млекопитающих in vitro и in vivo (1-4). Растет интерес к применению этого анализа к повреждению ДНК пресноводных и морских организмов с целью изучения последствий повреждения ДНК для окружающей среды. 1.1.1 Анализ Comet использовался для проверки генотоксичности различных соединений на клетках in vitro и in vivo. (5-7), а также для оценки дозозависимых антиоксидантных (защитных) свойств различных соединений (3, 8-11). При использовании этого метода были зарегистрированы значительно повышенные уровни повреждения ДНК в клетках, собранных у организмов на загрязненных участках, по сравнению с контрольными участками (12-15). Исследования также показали, что увеличение повреждения клеточной ДНК соответствует эффектам более высокого порядка, таким как замедление роста, выживаемости и развития, и коррелирует со значительным увеличением содержания загрязняющих веществ в организме (13, 16). 1.2 В этом руководстве представлены протоколы, которые облегчают выражение Щелочно-лабильные одноцепочечные разрывы ДНК и определение их распространенности относительно контрольных или эталонных клеток. Руководство носит общий характер и предназначено для ознакомления персонала лаборатории с основными требованиями и соображениями, необходимыми для проведения анализа Comet. Он не содержит процедур для доступных вариантов этого анализа, которые позволяют определять нещелочные лабильные одноцепочечные разрывы или двухцепочечные разрывы ДНК (8), различать различные типы клеток (13), идентифицировать клетки, подвергающиеся апоптозу. (запрограммированная гибель клеток, (1, 17)), измерение скорости репарации клеточной ДНК (10), обнаружение присутствия фотоактивных соединений, повреждающих ДНК (14), или обнаружение специфических повреждений ДНК (3, 18). 1.3 Настоящий стандарт не претендует на решение всех проблем безопасности, если таковые имеются, связанных с его использованием. Пользователь настоящего стандарта несет ответственность за установление соответствующих правил техники безопасности и охраны здоровья, а также определение применимости нормативных требований перед использованием. 1.3 Настоящее руководство построено следующим образом: РазделОбъем применения1Справочные документы2Терминология3Краткое содержание руководства4Значение и использование5Оборудование и реагенты6Процедуры анализа7Обработка данных8Отчетные данные9Ключевые слова10Приложение A1Ссылки
ASTM E2186-02 История
2002ASTM E2186-02a(2016) Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
2002ASTM E2186-02a(2010) Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
2002ASTM E2186-02a Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet
2002ASTM E2186-02 Стандартное руководство по определению одноцепочечного повреждения ДНК в эукариотических клетках с помощью анализа Comet