ASTM F2998-14
Руководство по использованию флуоресцентной микроскопии для количественной оценки площади распространения фиксированных клеток

Стандартный №

ASTM F2998-14

Дата публикации

2014

Разместил

American Society for Testing and Materials (ASTM)

Последняя версия

ASTM F2998-14

сфера применения

5.1. В хорошо контролируемых условиях количественная оценка морфологических особенностей клеточной популяции может использоваться для выявления изменений в клеточном поведении или состоянии. Изменения морфологии клеток можно ожидать, когда, например, существует ответ на изменения в организации клеточного цитоскелета (1), ответ клеток на токсичные соединения, изменения в состоянии дифференцировки и изменения свойств адгезии клеток к субстрату либо химические или механически индуцированные сигнальные пути на основе внеклеточного матрикса (ECM) (2, 3). Как правило, популяции клеток демонстрируют различную морфологию, даже если клетки генетически идентичны и находятся в гомогенной среде (4). Эти биологические вариации клеточного ответа обусловлены как вариациями клеточного цикла, так и стохастичностью клеточных реакций, которые контролируют адгезию и распространение в клетках. Используя измерения на основе микроскопии и соответствующие статистические процедуры отбора проб, можно измерить распределение морфологии клеток, например площадь распространения клеток на клетку. Такое распределение весьма характерно для рассматриваемой культуры и условий. 5.2 Важно отметить, что использование этого метода для клеток на трехмерных каркасных материалах или в них может усложнить интерпретацию данных. Топографические преобразования клеток на трехмерном материале могут потребовать полной объемной визуализации, а не только флуоресцентной визуализации в широком поле, как описано здесь. 5.3. Ниже приведены несколько примеров того, как это измерение можно использовать в лаборатории:&#— 5.3.1. Количественная оценка клеточной реакции на биоматериал. Измерение площади распространения клеток можно использовать для характеристики реакции клеток на биоматериалы. Например, распространение большинства типов клеток чрезвычайно чувствительно к жесткости культурального субстрата (5), (6). Важно отметить, что ответ клеток на ЕСМ может зависеть от подготовки матрицы. Например, одни и те же белки ЕСМ, приготовленные с фибриллярным или нефибриллярным поверхностным покрытием, могут привести к различной морфологической реакции. полезная метрика для мониторинга изменения условий культивирования клеток (то есть из-за компонента сыворотки, pH, числа пассажей, слияния и т. д.). Морфология клеток часто изменяется, когда клетки подвергаются стрессу и происходят процессы, связанные с гибелью клеток (то есть апотопоз). 5.3.3. Показатель контроля качества при производстве биоматериала. Измерения площади распространения клеток могут быть полезны для составления спецификаций биоматериала. Эти спецификации могут определять, как конкретная клеточная линия реагирует на искусственный биоматериал. 5.3.4. Показатели контроля качества для сравнительного анализа целостности и морфологии клеточной линии. Морфологические характеристики клеточной линии, выращенной в определенных условиях, в идеале должны быть одинаковыми во времени и в разных лабораториях. Таким образом, измерения площади распространения клеток могут быть полезны для подтверждения того, что в клеточных культурах не произошло никаких существенных изменений. Это измерение обеспечивает эталон, который полезен для установления текущего состояния клеточной культуры, и показатель, который можно нанести на график для повышения достоверности при внутрилабораторных и межлабораторных сравнениях клеточных измерений (7......

ASTM F2998-14 Ссылочный документ

• ASTM E1488 Стандартное руководство по статистическим процедурам, используемым при разработке и применении методов испытаний ASTM
• ASTM F2150 Стандартное руководство по характеристике и тестированию каркасов из биоматериалов, используемых в регенеративной медицине и тканеинженерных медицинских продуктах

ASTM F2998-14 История

• 2014 ASTM F2998-14 Руководство по использованию флуоресцентной микроскопии для количественной оценки площади распространения фиксированных клеток