ASTM F2131-02(2012)
Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- Стандартный №
- ASTM F2131-02(2012)
- Дата публикации
- 2002
- Разместил
- American Society for Testing and Materials (ASTM)
- состояние
- быть заменен
- ASTM F2131-21
- Последняя версия
- ASTM F2131-21
- сфера применения
- 1.1 В данном методе испытаний описан использованный метод и расчет результатов для определения in vitro биологической активности rhBMP-2 с использованием линии стромальных клеток мыши W-20, клон 17 (W-20-17). Этот клон был получен из стромальных клеток костного мозга линии мышей W++.2 1.2 Этот метод тестирования (анализа) был аттестован и утвержден на основе руководящих принципов валидации анализа Международного комитета по гармонизации3 (за исключением межлабораторной точности) для оценки биологическая активность rhBMP-2. Также изучалась значимость этого метода испытаний in vitro для формирования костей in vivo. Измеренный ответ в биоанализе W-20, индукция щелочной фосфатазы, коррелировал с эктопической костеобразующей способностью rhBMP-2 в тесте на использование in vivo (UT). rhBMP-2, который был частично или полностью инактивирован путем целенаправленного окисления двух метионинов надуксусной кислотой, использовался в качестве инструмента для сравнения активностей. Было показано, что окисление rhBMP-2 перуксусной кислотой специфически направлено на метионины с помощью пептидного картирования и масс-спектрометрии. Эти метионины находятся в гидрофобном рецептор-связывающем кармане на rhBMP-2. Окисленные образцы сравнивали вместе с инкубационным контролем и нативным контролем. Образцы, окисленные на 62, 87, 98 и 1008201%, имели уровни активности W-20 62, 20, 7 и 58201% соответственно. Инкубационные и нативные контрольные образцы сохраняли активность 1008201%. Образцы оценивали в UT и показали аналогичный эффект инактивации на костеобразующую активность. Образцы с активностью 628201;% и 208201;% в анализе W-20 продемонстрировали пониженные уровни костеобразования, аналогичные уровню снижения специфической активности W-20, по сравнению с инкубационным контролем. В имплантатах с активным rhBMP-2 7 и 58201;% эктопическая кость образовалась незначительно или вообще не образовывалась. 1.3 Таким образом, модификации молекулы rhBMP-2 в сайте связывания рецептора снижают активность как в W-20, так и в UT-анализе. Эти данные позволяют предположить, что единственный рецептор-связывающий домен на rhBMP-2 отвечает за активность как in vitro, так и in vivo, и что биоанализ W-20 является важным предиктором костеобразующей активности rhBMP-2. 1.4 Значения, указанные в единицах СИ, следует считать стандартными. Никакие другие единицы измерения в настоящий стандарт не включены. 1.5 Настоящий стандарт не претендует на решение всех проблем безопасности, если таковые имеются, связанных с ......
ASTM F2131-02(2012) История
- 2021 ASTM F2131-21 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2012) Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2007)e1 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2007) Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
