ASTM F2131-02(2007)e1
Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- Стандартный №
- ASTM F2131-02(2007)e1
- Дата публикации
- 2002
- Разместил
- American Society for Testing and Materials (ASTM)
- состояние
- быть заменен
- ASTM F2131-02(2012)
- Последняя версия
- ASTM F2131-21
- сфера применения
- Хотя этот метод испытаний можно использовать для оценки биологической активности неочищенных препаратов rhBMP-2, он был валидирован только для использования с препаратами высокой чистоты (>98 % по массе) препаратов rhBMP-2.1.1. Этот метод испытаний описывает использованный метод и расчет результатов для определения in vitro биологической активности rhBMP-2 с использованием линии стромальных клеток мыши W-20, клон 17 (W-20-17). Этот клон был получен из стромальных клеток костного мозга линии мышей W++.1.2 Этот метод тестирования (анализа) был аттестован и утвержден на основании руководящих принципов валидации анализа Международного комитета по гармонизации (за исключением межлабораторной точности) для оценки биологическая активность rhBMP-2. Также изучалась значимость этого метода испытаний in vitro для формирования костей in vivo. Измеренный ответ в биоанализе W-20, индукция щелочной фосфатазы, коррелировал с эктопической костеобразующей способностью rhBMP-2 в тесте на использование in vivo (UT). rhBMP-2, который был частично или полностью инактивирован путем целенаправленного окисления двух метионинов надуксусной кислотой, использовался в качестве инструмента для сравнения активностей. Было показано, что окисление rhBMP-2 перуксусной кислотой специфически направлено на метионины с помощью пептидного картирования и масс-спектрометрии. Эти метионины находятся в гидрофобном рецептор-связывающем кармане на rhBMP-2. Окисленные образцы сравнивали вместе с инкубационным контролем и нативным контролем. Образцы, окисленные на 62, 87, 98 и 100 %, имели уровни активности W-20 62, 20, 7 и 5 % соответственно. Инкубационные и нативные контрольные образцы сохраняли 100 % активность. Образцы оценивали в UT и показали аналогичный эффект инактивации на костеобразующую активность. Образцы с активностью 62% и 20% в анализе W-20 демонстрировали сниженные уровни костеобразования, аналогичные уровню снижения удельной активности W-20, по сравнению с инкубационным контролем. В имплантатах с активным rhBMP-2 7 и 5 % эктопическая кость образовывалась незначительно или вообще не образовывалась.1.3 Таким образом, модификации молекулы rhBMP-2 в сайте связывания рецептора снижают активность как в W-20, так и в UT-анализе. Эти данные позволяют предположить, что единственный рецептор-связывающий домен на rhBMP-2 отвечает за активность как in vitro, так и in vivo, и что биоанализ W-20 является важным предиктором костеобразующей активности rhBMP-2.1.4. указанные в единицах СИ, следует рассматривать как стандарт. 1.5 Настоящий стандарт не претендует на решение всех проблем безопасности, если таковые имеются, связанных с его использованием. Пользователь настоящего стандарта несет ответственность за установление соответствующих мер безопасности и охраны труда и определение применимости нормативных ограничений перед использованием.
ASTM F2131-02(2007)e1 История
- 2021 ASTM F2131-21 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2012) Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2007)e1 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02(2007) Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
- 2002 ASTM F2131-02 Стандартный метод исследования биологической активности рекомбинантного костного морфогенетического белка-2 человека (rhBMP-2) in vitro с использованием линии стромальных клеток мыши W-20
