ASTM F2149-01 Стандартный метод тестирования для автоматического анализа клеток8212; метод зоны электрического зондирования для подсчета и определения размера суспензий отдельных клеток
1.1 Этот метод испытаний, при условии понимания ограничений, охватывает процедуру как подсчета, так и измерения распределения по размерам большинства всех типов клеток. Приборы позволяют пользователю выбирать настройки размера ячеек, следовательно, этот метод тестирования не ограничивается конкретными типами клеток. Этот метод подходит как для суспензионных, так и для прикрепившихся клеточных культур (1). Это количественный лабораторный метод, не предназначенный для онлайнового или полевого использования. Результаты могут быть представлены как количество клеток на миллилитр или общее количество клеток на объем анализируемой клеточной суспензии. Как количество, так и распределение по размерам могут быть выражены в диаметре или объеме клеток в микронах, в фемтолитрах. 1.2 Клетки, обычно используемые в тканеинженерных медицинских продуктах (2), регулярно анализируются. Примерами являются хондроциты (3), фибробласты (4) и кератиноциты (5). Szabo и др. использовали этот метод как для измерения количества островков поджелудочной железы, так и для измерения их объема (6). Кроме того, для подсчета и анализа распределения по размерам свиных гепатоцитов, помещенных в экстракорпоральные системы помощи печени с картриджами из полых волокон, использовалось оборудование, использующее технологию электрических сенсорных зон. В этом исследовании (7) и других (6, 8) метод автоматических зон электрического зондирования был явно подтвержден на предмет превосходной точности и точности по сравнению с традиционным ручным методом, визуальным подсчетом клеток под микроскопом с использованием гемоцитометра. Эта проверка была продемонстрирована на широком спектре типов клеток. Кроме того, автоматизированная процедура является быстрой, надежной и экономически эффективной; это также сводит к минимуму различия между операторами, присущие ручным методам. 1.3. Это оборудование производится различными компаниями; однако во всех случаях используется электрический импеданс. Этот метод испытаний для подсчета и определения размера клеток основан на обнаружении и измерении изменений электрического сопротивления, создаваемого клеткой, подвешенной в проводящей жидкости, проходящей через небольшое отверстие (см. (рис. 1)). Когда клетки суспендируются в проводящей жидкости, например, в фосфатно-солевом буфере, они функционируют как дискретные изоляторы. Когда клеточная суспензия протягивается через небольшое цилиндрическое отверстие, прохождение каждой клетки изменяет импеданс электрического пути между двумя погруженными электродами, расположенными на каждой стороне отверстия. Электрический импульс, подходящий как для подсчета, так и для определения размеров, возникает в результате прохождения каждой ячейки через апертуру. Путь через апертуру, в котором обнаруживается клетка, известен как «зона электронного чувствительности». Этот метод испытаний позволяет избирательно подсчитывать клетки в очень узком диапазоне размеров путем электронного отбора генерируемых импульсов. Хотя количество импульсов указывает на количество клеток, амплитуда создаваемого электрического импульса зависит от объема клетки. Базовое сопротивление между электродами обусловлено сопротивлением проводящей жидкости внутри границ апертуры. Присутствие клеток в «электронной сенсорной зоне» повышает сопротивление проводящего пути, которое зависит от объема клетки. Анализ поведения клеток внутри апертуры показывает, что высота импульса, производимого клеткой, является параметром, который наиболее точно показывает пропорциональную величину объему клетки. 1.4. Ограничения обсуждаются следующим образом: 1.4.1. Совпадение8212; Иногда более одна ячейка одновременно пересекает апертуру. Генерируется только один больший импульс, а не два отдельных импульса. Результатом является меньшее количество клеток и более высокий объем клеток. Частота совпадений является статистически предсказуемой функцией концентрации клеток, которая корректируется прибором. Это называется коррекцией совпадений (8). Это явление можно свести к минимуму, обеспечивая тем самым большую точность результатов, используя относительно низкую ячейку.
ASTM F2149-01 История
2016ASTM F2149-16 Стандартный метод испытаний для автоматического анализа клеток – метод зоны электрического зондирования для подсчета и определения размера суспензий отдельных клеток
2001ASTM F2149-01(2007) Стандартный метод испытаний для автоматического анализа клеток — метод зоны электрического зондирования для подсчета и определения размера суспензий отдельных клеток
2001ASTM F2149-01 Стандартный метод тестирования для автоматического анализа клеток8212; метод зоны электрического зондирования для подсчета и определения размера суспензий отдельных клеток