ASTM F2259-10 Стандартный метод испытаний для определения химического состава и последовательности в альгинате с помощью спектроскопии протонного ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР)
Состав и последовательная структура альгината определяют функциональность альгината в применении. Например, гелеобразующие свойства альгината сильно зависят от мономерного состава и последовательной структуры полимера. Прочность геля будет зависеть от содержания гулуроновой кислоты (FG), а также от среднего количества последовательных гулуронатных фрагментов в структурах G-блока (NG>1). Химический состав и последовательную структуру альгината можно определить с помощью 1H- и 13C-спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Общее описание ЯМР можно найти в №761> USP24-NF19. Методика и задания ЯМР основаны на данных, опубликованных Grasdalen et al. (1979, 1981, 1983). , , Метод ЯМР позволил определить монадные частоты FM (доля маннуронатных звеньев) и FG (доля гулуронатных звеньев), четыре ближайшие соседние (диады) частоты FGG, FMG, FGM, FMM и восемь следующих ближайшие соседние (триады) частоты FGGG, FGGM, FMGG, FMGM, FMMM, FMMG, FGMM, FGMG. Знание этих частот позволяет вычислить среднечисловые значения длин блоков. NG представляет собой среднечисленную длину G-блоков, а NG>1 представляет собой среднечисленную длину G-блоков, из которых были исключены синглеты (-MGM-). Аналогично, NM представляет собой среднечисловую длину M-блоков, а NM>1 представляет собой среднечисловую длину M-блоков, из которых были исключены синглеты (-GMG-). ЯМР 13С необходимо использовать для определения М-центрированных триад и NM>1. Этот метод испытаний описывает только 1H ЯМР-анализ альгината. Альгинат можно хорошо охарактеризовать путем определения ФГ и НГ>1. Для получения хорошо разрешенных спектров ЯМР необходимо снизить вязкость и повысить подвижность молекул путем деполимеризации альгината до степени полимеризации примерно от 20 до 50. Для деполимеризации образцов альгината применяют кислотный гидролиз. Сушка вымораживанием с последующим растворением в 99 % D2O и еще одна сушка вымораживанием перед растворением в 99,9 % D2O дает образцы с низким содержанием 1H2O. ТТТА используется в качестве хелатора для предотвращения взаимодействия следов двухвалентных катионов с альгинатом. Хотя ТТТА является более эффективным хелатором, можно использовать и другие агенты, такие как ЭДТА и цитрат. Такие взаимодействия могут привести к уширению линий и избирательной потере интенсивности сигнала. Пробы анализируются при температуре 80°С. 1°С. Повышенная температура образца способствует снижению вязкости образца и перемещает сигнал протонов остаточной воды в область за пределами интересующей области. 1.1 Этот метод испытаний охватывает определение состава и последовательности мономеров альгината, предназначенного для использования в биомедицинских и фармацевтических целях, а также в тканевой инженерной медицинской продукции (TEMP) с помощью протонного ЯМР высокого разрешения (1H ЯМР). Руководство по характеристике альгината опубликовано под названием Guide F2064. 1.2 Альгинат, линейный полимер, состоящий из &#β
——D-маннуроната (M) и его эпимера C-5 &#α
——L-гулуроната (G), связанных &#β
——( 1>4) гликозидные связи, характеризуются расчетом таких параметров, как соотношение маннуронат/гулуронат (M/G), содержание гулуроновой кислоты (G-содержание) и средняя длина блоков последовательных G-мономеров (т.е. NG>1
ASTM F2259-10 История
2010ASTM F2259-10(2012)e1 Стандартный метод испытаний для определения химического состава и последовательности в альгинате с помощью спектроскопии протонного ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР)
2010ASTM F2259-10 Стандартный метод испытаний для определения химического состава и последовательности в альгинате с помощью спектроскопии протонного ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР)
2008ASTM F2259-03(2008) Стандартный метод испытаний для определения химического состава и последовательности в альгинате с помощью спектроскопии протонного ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР)
2003ASTM F2259-03 Стандартный метод испытаний для определения химического состава и последовательности в альгинате с помощью спектроскопии протонного ядерного магнитного резонанса (1H ЯМР)