Метод испытания Определение общего количества колоний 5.1.1 Принцип После инкубации при 37°C в течение 24 часов микроорганизмы в пробе воды вызывают изменения pH в результате метаболизма, вызывая кислотно-щелочной показатель в реагенте для обнаружения общего числа колоний. для изменения цвета.Это изменение цвета можно обнаружить невооруженным глазом.Захват также может быть захвачен источником сигнала фотоэлектрического детектора для завершения измерения. 5.1.2 Холодильник для инструментов и оборудования: 2℃～5℃. Вихревой генератор. Стерильная пипетка: 1 мл (со шкалой 0,01 мл), 5 мл (со шкалой 0,1 мл) или микропипетка с наконечником. Инкубатор с постоянной температурой: 36℃±1℃. Система фотоэлектрического обнаружения микроорганизмов (например, фотоэлектрический детектор ФОРБИД-М). Фотоэлектрическая детекторная трубка (например, фотоэлектрическая детекторная трубка FORBID-M). 5.1.3 Среда и реагенты Реагенты для быстрого обнаружения общего количества бактерий: см. Приложение 2.1. Штаммы контроля качества для общего количества бактерий: Escherichia coli CICC10389, Staphylococcus aureus ATCC25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC9027. 5.1.4 Процедура проверки Процедура проверки общего количества бактериальных колоний показана на рисунке 1. Рисунок 1. Процедура определения общего числа бактерий. 5.1.5 Этапы операции. Подготовьте культуральную среду. Используйте одноразовую стерильную пипетку или микропипетку и наконечник для поглощения реагента быстрого обнаружения для определения общего количества бактерий и добавьте его в пробирку для фотоэлектрического обнаружения, 5 мл/пробирка. Для инокуляции образца используйте одноразовую стерильную пипетку, чтобы поглотить 1 мл смешанного образца, введите его в пробирку для фотоэлектрического обнаружения с реагентом для быстрого обнаружения для общего подсчета бактериальных колоний и отметьте его. Одна из пробирок для обнаружения не содержит тестируемого образца в качестве холостого контроля. Построение стандартной кривой 5.1.5.3.1 Если требуется количественный анализ, используйте стерильный образец после стерилизации в качестве матрицы для разведения, используйте вихревой шейкер для выполнения десятикратного градиентного разведения общего количества колоний штаммов контроля качества и выберите 5-кратное градиентное разведение. 7 Для получения соответствующего градиента разведения используйте микробную фотоэлектрическую систему обнаружения для обнаружения в соответствии с этапами работы, описанными в 5.1.5.1–5.1.5.4, и в то же время культивируйте в соответствии с методом чашки с питательным агаром, описанным в GB4789.2. 5.1.5.3.2 Постройте стандартную кривую линейной корреляции, в которой по оси абсцисс отведено время точки перегиба установки прибора (ч), а по оси ординат — логарифм результата подсчета тарелок (logC). Если коэффициент линейной корреляции удовлетворяет R2≥0,98, его можно name Стандартная кривая общего количества колоний записывается в прибор, в противном случае стандартную кривую необходимо восстановить заново. 5.1.5.3.3 Если нет необходимости количественно оценивать результаты, сразу пропускают этап построения стандартной кривой в 5.1.5.3. Культура 5.1.5.4.1 Качественное обнаружение вручную: поместите пробирку для фотоэлектрического обнаружения в инкубатор с постоянной температурой 36 ℃ ± 1 ℃ на 12-24 часа. 5.1.5.4.2 Автоматическое качественное обнаружение: поместите пробирку для фотоэлектрического обнаружения в фотоэлектрический детектор и установите программу для запуска обнаружения: общее количество колоний, 24 часа. 5.1.5.4.3 Количественное обнаружение: Поместите пробирку фотоэлектрического обнаружения в фотоэлектрический детектор, выберите стандартную кривую общего количества колоний, установите программу и начните обнаружение: общее количество колоний, 24 часа. Оценка и выражение результатов 5.1.5.5.1 Качественное определение вручную: наблюдают за изменением цвета фотоэлектрической детекторной пробирки после культивирования в течение 12–24 часов. По сравнению с холостым контролем, если пробирка явно мутная или желтоватая, ее считают положительной по общему числу бактериальных колоний, то есть «общему количеству обнаруженных колоний на 1 мл воды»; если тест пробирка не мутнеет и не желтеет, ее считают отрицательной по общему числу колоний бактерий, то есть «Общее количество колоний бактерий не обнаружено в 1 мл воды». 5.1.5.5.2 Автоматическое качественное обнаружение: отчет об обнаружении будет автоматически создан после запуска программы. Если в протоколе испытания указано, что общее количество бактериальных колоний составляет >1 КОЕ/мл, он считается положительным, то есть «общее количество обнаруженных колоний на 1 мл воды»; если в протоколе испытания указано, что общее количество бактериальных колоний
T/HIFSA 0002-2023 История
2023T/HIFSA 0002-2023 «Фотоэлектрический метод обнаружения микробов качества воды»