T/AFFI 011-2022 Определение остатков гиббереллина и форхлорфенурона в плодовых продуктах методом жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (Англоязычная версия)
Определение остатков гиббереллинов и клофенурона во фруктовых продуктах Жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия 1 Область применения Настоящий документ применим к изюму, красным финикам и другим фруктовым продуктам в Синьцзяне. В этом документе указаны методы тестирования регуляторов роста растений — гиббереллинов и клофенурона — в фруктовых продуктах, таких как изюм и красные финики. 2Нормативно-справочные документыДокументы, цитируемые в настоящем документе, необходимы для применения настоящего документа. Для датированных ссылок к настоящему документу применяется только датированная версия. Для недатированных справочных документов к настоящему документу применяется последняя версия (включая все поправки). GB/T Изделия, изготовленные различными методами и технологиями обработки. 3.2 Регуляторы роста растений – это искусственно синтезированные (или полученные из микроорганизмов естественным путем) органические соединения, которые обладают регуляторным действием на рост и развитие, аналогичным природным гормонам растений. Этот документ в основном относится к гиббереллинам (GA3) и форхлорфенурону (4-CPPU). 4 5Реагенты и материалы. Если не указано иное, в анализе используются только реагенты, подтвержденные как аналитические, и вода первого сорта, указанная в GB/T 6682. 5.1.5.1.5 Натрия цитрата дигидрат (д.а.ч.); 5.1.6.Сесквигидрат динатриевой соли цитрата (д.а.ч.); 5.1.7.1% раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле: отмерить 10 мл муравьиной кислоты. Ацетонитрил разбавить до мерную колбу вместимостью 1000 мл и хорошо перемешать 5.1.8 0,1% раствор муравьиной кислоты в воде: в мерную колбу вместимостью 1000 мл отмерить 1 мл муравьиной кислоты, добавить чистую воду и хорошо перемешать. 5.2 Стандартный продукт 8), чистота превышает 99%. 5.3 Приготовление стандартного раствора 5.3.1 Приготовление смешанного исходного стандартного раствора (1 мг/мл): Точно взвешивают по 10 мг каждого стандарта гиббереллина и клофенурона и разбавляют до 10 мг метанолом. мл, хранят замороженными при -18°С. °C, в защищенном от света месте, действителен в течение 12 месяцев. 5.3.2 Приготовление смешанного стандартного промежуточного раствора (10 мкг/мл): Аккуратно отберите 1,0 мл исходного смешанного стандартного раствора и разбавьте его до 100 мл метанолом, заморозьте и храните при -18°C в темноте, срок действия 6 месяцев. 5.4 Материалы 5.4.1 Силанизированный силикагель этилендиамин-N-пропила (PSA): размер частиц: 40~60 мкм 5.4.2 Силикагель, связанный октадецилсиланом (C18): Размер частиц: 50 мкм 5.4.3 Графитированная сажа (GCB): размер частиц 40~120 мкм 5.4.4 Керамический однородный протон: 2 см (длина) × 1 см (внешний диаметр) или эквивалент 5.4.5 Микропористая мембрана: 13 мм × 0,22 мкм или эквивалент. 6Приборы и оборудование 6.1Жидкостная хроматография-тройной квадрупольный масс-спектрометр: оснащен источником ионизации электрораспылением (ESI); 6.2Весы электронные: чувствительность 0,01г и 0,01мг; 6.3Центрифуга: скорость не ниже 5000 об/мин, 6,4 ультразвуковой очиститель, 6,5 измельчитель тканей. 6.6 Вихревой смеситель. 7 7.2 Экстракция образца Аккуратно взвесьте 2 г измельченного образца (с точностью до 0,01 г) в центрифужную пробирку объемом 50 мл, добавьте 10 мл 1% раствора муравьиной кислоты и ацетонитрила для экстракции, 1 керамический гомогенный протон и Вортекс Хорошо перемешайте в течение 30 с, добавьте 5–7 г хлорида натрия, 1 г дигидрата цитрата натрия, 0,5 г сесквигидрата динатрия цитрата, перемешайте на вортексе в течение 30 с, ультразвуковую экстракцию в течение 20 мин, центрифугу 5000° в течение 5 минут при об/мин, и перенесите 2 мл надосадочной жидкости в пластиковую центрифужную пробирку, содержащую 150 мг безводного сульфата магния, 50 мг PSA и 50 мг C18. Для образцов более темного цвета добавьте в центрифужную пробирку еще одну пробирку. Добавьте 50 мг GCB, вортексируйте и перемешивайте в течение 30 секунд, дайте отстояться в течение 1 минуты и возьмите мембрану фильтра надосадочной жидкости (5.4.5) для измерения. 7.3 Определение 7.3.1 Колонка с исходными условиями жидкостной хроматографии: колонка Hypersil GOLD C18 (2,1 мм × 100 мм, размер частиц 1,9 мкм) или колонка с эквивалентными характеристиками; Подвижная фаза: А: 0,1% муравьиная кислота-вода; В: метанол. Процедура градиентного элюирования показана в таблице 1; Скорость потока: 0,2 мл/мин; Температура колонки: 40 ℃; Объем инъекции: 1 мкл. Таблица 1. Время программы градиентного элюирования/мин VA VB 0,0 90 10 2,0 90 10 5,0 10 90 7,0 10 90 7,5 90 10 10,0 90 10 7.3.2 Эталонные условия масс-спектрометрии Тип источника ионов: источник ионизации электрораспылением ; Сканирование метод: режим мониторинга множественных реакций (Multiple Reaction Monitoring, MRM), положительные и отрицательные ионы сканируются одновременно.Информация о масс-спектре родительских ионов и ионов-продуктов двух веществ показана в Таблице 2. Напряжение электрораспыления: положительное. ионы 3500В Отрицательные ионы 2500В Температура источника ионов: 350℃ Распылительный газ: 40Арб Вспомогательный газ: 10Арб. Таблица 2. Информация о масс-спектре исходного иона и иона-продукта гиббереллина и хлорфенурона. Название соединения. Режим ионизации. Энергия столкновения родительского иона с ионом-продуктом (В). Напряжение декластеризации (В). Гиббереллин отрицательный 345,15 239,19*/143,14 -14,06/ -28,17 -115 Хлорфенурон положительный 248,22 129,07*/93,12 16,29/31,71 82 Примечание: * указывает количественный ион 7.3.3 Чтобы построить матричную стандартную кривую, выберите холостой образец с теми же или подобными свойствами, что и образец, подлежащий испытанию в соответствии с 7.1 и 7.2. Обработка методом получения пустого матричного раствора. Точно отмерьте определенное количество смешанного стандартного промежуточного раствора и постепенно разбавляйте его раствором пустой матрицы до массовой концентрации 0,005 мкг/мл, 0,010 мкг/мл, 0,020 мкг/мл, 0,050 мкг/мл, соответствие матрицы рабочие растворы стандартной серии 0,100 мкг/мл и 0,200 мкг/мл. В соответствии с характеристиками прибора и потребностями в обнаружении для анализа с помощью трехквадрупольного масс-спектрометра для жидкостной хроматографии выбираются не менее 5 точек концентрации. В качестве оси ординат использовали площадь хроматографического пика количественного иона гиббереллина и хлорфенурона, а в качестве оси абсцисс для построения стандартной кривой использовали концентрацию соответствующего матричного рабочего раствора, соответствующего стандартному ряду. 7.3.4 Качественные и количественные 7.3.4.1 Время удерживания Время удерживания хроматографического пика испытуемого компонента должно быть близко ко времени удерживания соответствующего стандартного хроматографического пика, а относительная погрешность должна быть в пределах ±2,5%. 7.3.4.2 Коэффициент содержания ионов При одинаковых условиях эксперимента, если время удерживания хроматографического пика испытуемого компонента в детектируемой пробе и время удерживания соответствующего стандартного хроматографического пика соответствуют требованиям 7.3.3.1, и после вычитания Фон В масс-спектре образца появляются два выбранных иона-продукта тестируемого соединения, и в одной и той же серии обнаружения и одном и том же соединении соотношение содержания ионов-продуктов тестируемого соединения в образце эквивалентно массовая концентрация продуктовых ионов матричного стандартного раствора.Если допустимое отклонение не превышает диапазон, указанный в таблице 3, можно определить наличие испытуемого соединения в пробе. Таблица 3. Максимально допустимое отклонение коэффициента содержания ионов во время качественного анализа. Коэффициент содержания ионов > 50 > 20 ~ 50 > 10 ~ 20 ≤ 10. Допустимое отклонение ± 20 ± 25 ± 30 ± 50 7.3.4.3 Количественный количественный анализ использует внешнюю количественную стандартизацию. 7.4 Холостой эксперимент должен проводиться в соответствии с вышеуказанными условиями и процедурами измерения, за исключением того, что образец не добавляется. 8. Расчет результата. Остаточные количества гиббереллина и хлорфенурона в пробе рассчитывают по формуле (1). Где: Концентрация, нг/мл; m – масса пробы, г; V – общий объем экстракционного раствора пробы, мл; коэффициент пересчета 1000 единиц. Примечание: результаты расчета. сохранить три значащие цифры. 9. Точность Абсолютная разница двух независимых результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, не превышает 10% от среднего арифметического.
T/AFFI 011-2022 История
2022T/AFFI 011-2022 Определение остатков гиббереллина и форхлорфенурона в плодовых продуктах методом жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии
2021T/AFFI 011-2021 Стандарты проверки остатков пестицидов в мармеладе