T/SAIA 001-2021
Правила молекулярной идентификации ДНК семян буплеури (Англоязычная версия)

Стандартный №

T/SAIA 001-2021

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2021

Разместил

Group Standards of the People's Republic of China

состояние

быть заменен 2022-01

быть заменен

T/SAIA 001-2022

Последняя версия

T/SAIA 001-2022

сфера применения

На основе технологии флуоресцентной ПЦР в реальном времени была создана система мультиплексной флуоресцентной ПЦР в реальном времени.Последовательность гена ITS в штрих-коде ДНК использовалась в качестве целевого гена для создания универсальных праймеров и зондов для Bupleurum и специфических праймеров и зондов для Bupleurum. angustifolia и Bupleurum niger. Игла, благодаря оптимизации и скринингу системы флуоресцентной полимеразной цепной реакции и условий реакции, был создан метод множественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции в реальном времени, который может одновременно идентифицировать Bupleurum angustifolia и Bupleurum angustifolia в одной и той же реакции ПЦР. Исходные компоненты семян Bupleurum. Экстракция ДНК: смешайте по 0,3 г каждого материала и измельчите его в порошок в стерилизованной ступке под жидким азотом. Предварительно нагрейте экстракционный буфер CTAB, содержащий 2% β-меркаптоэтанола, на водяной бане с температурой 65°C; поместите 0,15 г измельченного образца в центрифужную пробирку объемом 2,0 мл; добавьте 700 мкл экстракционного буфера CTAB, предварительно нагретого до 65°C. Буфер инкубируйте при 65°C. °C в течение 30 минут, встряхивайте 3-4 раза за это время; добавьте 700 мкл хлороформа/изоамилового спирта (24:1), осторожно переверните, чтобы тщательно перемешать, центрифугируйте при 12000 об/мин в течение 10 минут, аспирируйте надосадочную жидкость и перенесите в другую центрифужную пробирку; перенесите надосадочную жидкость в новую центрифужную пробирку, добавьте 2/3 объема предварительно охлажденного до -20°С изопропилового спирта, тщательно перемешайте и поместите при -20°С на 30°С мин или на ночь, центрифугируйте при 12 000 об/мин в течение 15 минут для сбора осадка; добавьте 700 мкл 70% абсолютного этанола для промывки, центрифугируйте при 12 000 об/мин в течение 2 минут, отбросьте надосадочную жидкость, повторите этот шаг; работайте при комнатной температуре или в ультрачистом режиме. Дайте ДНК проветриться. высушить естественным путем в Тайчжуне в течение 5–10 минут; добавить 50 мкл бидистиллированной воды или буфера TE, перемешать и тщательно перемешать, центрифугировать при 12 000 об/мин в течение 2 минут и хранить при 4°C для дальнейшего использования или при -20. °С.

T/SAIA 001-2021 История

• 2022 T/SAIA 001-2022 Технические условия на уничтожение эпидемического очага бруцеллеза в хозяйствах крупного рогатого скота и овцеводства
• 2021 T/SAIA 001-2021 Правила молекулярной идентификации ДНК семян буплеури