1Область применения Этот стандарт требует изюма в Синьцзяне. Настоящий стандарт определяет методы определения афлатоксина В1, афлатоксина В2, афлатоксина G1, афлатоксина G2, охратоксина А, токсина Т-2, фумонизина В2 и патулина в изюме. Этот документ применим для обнаружения 8 остатков микотоксинов в изюме в этом регионе. 2Нормативно-справочные документыДокументы, цитируемые в настоящем документе, необходимы для применения настоящего документа. Для датированных ссылок к настоящему документу применяется только датированная версия. Для недатированных справочных документов к настоящему документу применяется последняя версия (включая все поправки). GB/T6682Характеристики и методы испытаний аналитической лабораторной воды 3Термины и определения В этой статье нет терминов и определений. 4 Принцип. Образец измельчают, экстрагируют 1% раствором муравьиной кислоты в ацетонитриле, экстракт очищают дисперсионной твердофазной экстракцией, определяют с помощью жидкостной хроматографии - тройного квадрупольного масс-спектрометра и количественно определяют методом внешнего стандарта. 5Реагенты и материалы. Если не указано иное, в анализе используются только реагенты, подтвержденные как аналитические, и вода первого сорта, указанная в GB/T 6682. 5.1 Реагенты 5.1.1 Ацетонитрил (хроматографически чистый) 5.1.2 Натрия хлорид (д.а.ч.) 5.1.3 Магния сульфат безводный (д.ч.) 5.1.5 Натрия цитрат дигидрат (д.ч.) ); 5.1.6 Полугидрат цитрата динатрия (д.а.ч.); Ацетонитрил развести в мерной колбе вместимостью 1000 мл и хорошо перемешать; 5.1.8 0,1% водный раствор муравьиной кислоты: отмерить 1 мл муравьиной кислоты и разбавить до мерной колбы вместимостью 1000 мл чистой водой, хорошо перемешать; 5,2стандартный продукт ; Афлатоксин B1 (номер CAS: 1162-65-8), чистота более 98%, афлатоксин B2 (номер CAS: 7220-81- 7), чистота более 98%, афлатоксин G1 (номер CAS: 1165-39-5), чистота более 98%, афлатоксин G2 (номер CAS: 7241-98-7), чистота более 98%. %, охратоксин А (номер CAS: 303-47-9), чистота более 98%, токсин Т-2 (номер CAS: 21259-20-1), чистота более 98%, фумонизин B2 ( Номер CAS: 116355-84-1), чистота более 95%, Патулин (номер CAS: 149-29-1), чистота более 98%. 5.3 Приготовление стандартного раствора 5.3.1 Приготовление исходного стандартного раствора патулина (1 мг/мл): Точно взвесьте 10 мг стандарта патулина и разбавьте его до 10 мл ацетонитрилом, -18°C. Храните в замороженном и защищенном от света месте, срок действия 12. месяцы. 5.3.2 Приготовление промежуточного стандартного раствора патулина (10 мкг/мл): Аккуратно отберите 1,0 мл исходного стандартного раствора патулина и разбавьте его до 100 мл ацетонитрилом, заморозьте и храните в темноте при -18°C, срок действия 6 лет. . 5.3.3 Приготовление смешанных исходных стандартных растворов остальных 7 микотоксинов (1 мг/мл): Точно взвесьте 10 мг каждого из 7 стандартов токсинов, разбавьте до 10 мл метанолом и заморозьте при -18°C. Храните вдали от легкий, действителен в течение 12 месяцев. 5.3.4 Приготовление смешанных стандартных промежуточных растворов других 7 микотоксинов (10 мкг/мл): Аккуратно отберите 1,0 мл исходного смешанного стандартного раствора и разбавьте до 100 мл метанолом, затем заморозьте и храните при -18°C в темноте. ., действителен в течение 6 месяцев. 5.4 Материалы 5.4.1 Силанизированный силикагель этилендиамин-N-пропила (PSA): размер частиц: 40~60 мкм 5.4.2 Силикагель, связанный октадецилсиланом (C18): Размер частиц: 50 мкм 5.4.3 Графитированная сажа (GCB): размер частиц 40~120 мкм 5.4.4 Керамический однородный протон: 2 см (длина) × 1 см (внешний диаметр) или эквивалент 5.4.5 Микропористая мембрана: 13 мм × 0,22 мкм или эквивалент. 6Приборы и оборудование 6.1Жидкостная хроматография-тройной квадрупольный масс-спектрометр: оснащен источником ионизации электрораспылением (ESI); 6.2Весы электронные: чувствительность 0,01г и 0,01мг; 6.3Центрифуга: скорость не ниже 5000 об/мин, 6,4 ультразвуковой очиститель, 6,5 измельчитель тканей. 6.6 Вихревой смеситель. 7 Этапы анализа 7.1 Подготовка проб Возьмите 500 г образцов сушеного винограда в случайном порядке, измельчите их пульверизатором и отложите в сторону. 7.2 Экстракция образца Точно взвесьте 2 г измельченного образца (с точностью до 0,01 г) в центрифужную пробирку емкостью 50 мл, добавьте 10 мл воды, дайте постоять 30 минут, добавьте 10 мл 1% муравьиной кислоты. кислота - экстракт ацетонитрила, 1 керамический гомогенизатор, перемешивайте на вортексе в течение 30 секунд, добавьте 5–7 г хлорида натрия, 1 г дигидрата цитрата натрия, 0,5 г сесквигидрата динатрия цитрата, перемешивайте на вортексе 30 секунд, ультразвуковую экстракцию в течение 20 минут, центрифугируйте при 5000 об/мин в течение 5 мин, абсорбируйте 2 мл надосадочной жидкости в пластиковую центрифугу, содержащую 150 мг безводного сульфата магния, 50 мг ПСА и 50 мг C18. В пробирку для образцов более темного цвета добавьте еще 25. мг ГХБ в центрифужную пробирку, перемешайте на вортексе в течение 30 секунд, дайте отстояться в течение 1 минуты и отберите надосадочную жидкость из мембраны фильтра (5.4.5) для измерения. 7.3 Измерение 7.3.1 Колонка для эталонных условий ЖХ: При измерении патулина используйте хроматографическую колонку Т3 (2,1 мм × 100 мм, размер частиц 1,8 мкм) или хроматографическую колонку с эквивалентными характеристиками; при измерении остальных 7 микотоксинов используйте хроматографическую колонку C18 (2,1 мм × 100 мм, размер частиц 1,9 мкм) или колонку с эквивалентными характеристиками. Подвижная фаза: при измерении патулина А: вода, Б: ацетонитрил, при измерении остальных 7 микотоксинов А: 0,1% муравьиная кислота-вода, Б: метанол. Процедура градиентного элюирования представлена в таблице 1. Скорость потока: 0,2 мл/мин, температура колонки 40 ℃, объем впрыска: 2 мкл. Таблица 1. Время программы градиентного элюирования/мин VA VB 0,0 90 10 2,0 90 10 5,0 10 90 7,0 10 90 7,5 90 10 10,0 90 10 7.3.2 Эталонные условия масс-спектрометрии Тип источника ионов: источник ионизации электрораспылением ; Сканирование Метод: Режим мониторинга множественных реакций (Multiple Reaction Monitoring, MRM).При измерении патулина используется сканирование отрицательными ионами (ES-). При измерении остальных семи микотоксинов использовалось сканирование положительными ионами (ES+).Информация о масс-спектре исходных ионов и ионов-продуктов восьми веществ приведена в Таблице 2. Напряжение электрораспыления:
——2500 В, 3500 В. Температура источника ионов: 350°C. Распылительный газ: 40 Arb Вспомогательный газ: 10 Arb. Таблица 28 видов микотоксинов. Информация о масс-спектре ионов-предшественников и дочерних ионов. Название соединения. Режим ионизации. Энергия столкновения дочерних ионов-предшественников ионов (В) Напряжение декластеризации (В). 315,1 259,0*/287,1 28,55/25,05 173 Афлатоксин G1 Положительный 329,1 214,5*/243,0 31,37/25,56 166 Афлатоксин G2 Положительный 331,1 245,1*/313,1 28,84/22,82 1 83 Охратоксин А Положительный 402,1 167,0*/ 358,1 35,03/18,27 137 Т-2 токсин положительный 489,3 245,1*/327,1 26,23/22,61 189 Фумонизин B2 положительный 706,3 336,6*/353,1 37,10/31,16 169 Патулин отрицательный 153,0 109,1*/8 1,1 8,41/11,44 59 Примечание: * указывает количественный результат ионный стол. 7.3.3 Чтобы построить стандартную кривую матрицы, выбирают холостой образец с теми же или подобными свойствами, что и испытуемый образец, и обрабатывают его в соответствии с методами, указанными в 7.1 и 7.2, для получения раствора холостой матрицы. Точно отмерьте определенное количество стандартного промежуточного раствора патулина и смешанного стандартного промежуточного раствора и используйте пустой матричный раствор для постепенного разбавления массовой концентрации патулина до 0,050 мкг/мл, 0,100 мкг/мл, 0,150 мкг/мл, 0,200 мкг/мл. , 0,250 мкг/мл, 0,500 мкг/мл, массовые концентрации остальных семи микотоксинов составляют 0,010 мкг/мл, 0,020 мкг/мл, 0,050 мкг/мл, 0,100 Соответствие матрицы рабочие растворы стандартной серии с концентрацией мкг/мл, 0,200 мкг/мл и 0,500 мкг/мл. В соответствии с характеристиками прибора и потребностями в обнаружении для анализа с помощью трехквадрупольного масс-спектрометра для жидкостной хроматографии выбираются не менее 5 точек концентрации. Нарисуйте стандартную кривую, по оси ординат отобразите площадь пика хроматограммы количественного иона каждого измеряемого компонента, а по оси абсцисс — концентрацию соответствующей матрицы, соответствующей рабочему раствору стандартного ряда. 7.3.4 Качественные и количественные 7.3.4.1 Время удерживания Время удерживания хроматографического пика испытуемого компонента должно быть близко ко времени удерживания соответствующего стандартного хроматографического пика, а относительная погрешность должна быть в пределах ±2,5%. 7.3.4.2 Коэффициент содержания ионов При одинаковых условиях эксперимента, если время удерживания хроматографического пика испытуемого компонента в детектируемой пробе и время удерживания соответствующего стандартного хроматографического пика соответствуют требованиям 7.3.4.1, и после вычитания Фон В масс-спектре образца появляются два выбранных иона-продукта тестируемого соединения, и в одной и той же серии обнаружения и одном и том же соединении соотношение содержания ионов-продуктов тестируемого соединения в образце эквивалентно массовая концентрация продуктовых ионов матричного стандартного раствора.Если допустимое отклонение не превышает диапазон, указанный в таблице 3, можно определить наличие испытуемого соединения в пробе. Таблица 3. Максимально допустимое отклонение коэффициента содержания ионов во время качественного анализа. Коэффициент содержания ионов > 50 > 20 ~ 50 > 10 ~ 20 ≤ 10. Допустимое отклонение ± 20 ± 25 ± 30 ± 50 7.3.4.3 Количественный количественный анализ использует внешнюю количественную стандартизацию. 7.4 Холостой эксперимент должен проводиться в соответствии с вышеуказанными условиями и процедурами измерения, за исключением того, что образец не добавляется. 8. Расчет результата. Количество остатков микотоксинов в образце рассчитывают по формуле (1). bsp;(1) В формуле: /мл; m - масса пробы, г; V - общий объем экстракционного раствора пробы, мл; 1000-единичный перевод. Примечание: В результатах расчетов сохраняются три значащие цифры. 9. Прецизионность означает, что абсолютная разница между двумя независимыми результатами измерений, полученными в условиях повторяемости, не превышает 15 % от среднего арифметического значения. 10Ионные хроматограммы стандартных растворов остальных восьми микотоксинов см. в Приложении А.
T/AFFI 038-2023 История
2023T/AFFI 038-2023 Определение остатков 8 микотоксинов в изюме методом жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии