Термины и определения К данному документу применяются следующие термины и определения. Респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота Респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота, BRSV Респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота представляет собой одноцепочечный вирус с отрицательной РНК, который принадлежит к Paramyxoviridae и Pneumovirus. Заражение молочного и мясного скота может вызвать синдром острого респираторного заболевания. 3.2 Конкурентный ИФА Конкурентный иммуноферментный анализ, ИФА Конкурентный метод ИФА заключается в нанесении известного специфического антигена на твердофазный носитель и добавлении его в тест. Образец и конъюгат фермента соответствующее антитело может конкурировать с антигеном на носителе и ферментным конъюгатом, смывать несвязавшийся материал и конкурентно связанный ферментный конъюгат, добавлять ферментный субстрат и переходить к цветной реакции.Определение антител. 4. Подготовка к тесту для конкурентного иммуноферментного анализа. Экспериментальная обстановка, приборы и оборудование, приготовление промывного раствора, приготовление разбавителя и приготовление рабочего раствора индикатора должны осуществляться в соответствии с положениями инструкции к набору. Дистиллированная вода для разбавления должна соответствовать требованиям GB/T6682. Образцы для испытаний Соберите в асептических условиях 2–3 мл бычьей венозной крови, коагулируйте естественным путем в течение 1–2 часов, центрифугируйте со скоростью 1500–2000 об/мин в течение 5 минут, соберите сыворотку в центрифуге емкостью 1,5 мл. трубка. Перед использованием доведите все реагенты (кроме конъюгатов) до комнатной температуры (20℃ ~ 25℃), осторожно встряхните или переверните, чтобы реагенты смешались равномерно. 4.3.1 Снимите планшет. Выньте микропланшет и отметьте положение образца в протоколе операции. При использовании части микропланшета удаляйте ровно столько полосок, сколько необходимо для обнаружения образца. Неиспользованные микролуночные полоски следует завернуть в оловянную фольгу, хранить в сухом месте, запечатанным и хранить при температуре 2℃~8℃. 4.3.2 Добавьте образец в соответствии с концентрацией, указанной в инструкции к набору, разбавьте образец сыворотки, добавьте образец для тестирования в каждую лунку и добавьте отрицательный и положительный контроли в соответствии с расположением лунок планшета. 4.3.3 Разведение ферментного конъюгата Используйте разбавитель, чтобы развести ферментный конъюгат до необходимого количества. 4.3.4 Добавьте ферментный конъюгат Добавьте ферментный конъюгат в каждую лунку и хорошо встряхните. 4.3.5 После запечатывания микропланшета инкубируйте его при 37°C. 4.3.6 Промойте планшет.Удалите жидкость из микропланшета и хорошо промойте каждый планшет 6 раз примерно по 300 мкл промывочного раствора. После каждой промывки стряхивайте жидкость в каждой лунке планшета, не допускайте высыхания реакционного планшета во время промывки и перед добавлением следующего реагента, избегайте образования пузырьков воздуха в лунках. Крепко зажмите планшет и впитайте оставшуюся жидкость. 4.3.7 Добавьте субстрат Добавьте раствор субстрата в каждую лунку. Инкубировать при комнатной температуре в защищенном от света месте. 4.3.8 Добавьте стоп-раствор в каждую лунку для остановки реакции. 4.3.9 Определение значения оптической плотности (значения OD) Предварительно прогрейте устройство для считывания микропланшетов в течение 15 минут и считайте значение оптической плотности длины волны в течение 5 минут после добавления стоп-раствора. Экспериментальный тест на достоверность действителен только при соблюдении условий, указанных в инструкциях к набору. Расчет результата Для расчета результата используйте формулу расчета, указанную в руководстве к набору. Результаты оценивались с использованием критериев оценки, указанных в инструкциях к набору.
T/NAASS 059-2023 История
2023T/NAASS 059-2023 Техническая спецификация для выявления конкурентных антител ИФА против респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота