T/SDAA 0054-2021
Технический код остатков 12 видов β-агонистов в пищевых продуктах животного происхождения. Иммуноферментный анализ. (Англоязычная версия)

Стандартный №

T/SDAA 0054-2021

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2021

Разместил

Group Standards of the People's Republic of China

Последняя версия

T/SDAA 0054-2021

сфера применения

Техническая спецификация на обнаружение 12 препаратов-агонистов β-рецепторов в пищевых продуктах животного происхождения ИФА1 Область применения Настоящий документ определяет обнаружение 12 видов препаратов-агонистов β-рецепторов в пищевых продуктах животного происхождения Технические условия для остаточных количеств бета-агонистов. Настоящий документ применим к кленбутеролу, сальбутамолу, хлорпреналину, тербуталину, тобутеролу, бромбутеролу, мапентеролу, сибутеролу в свинине, говядине и баранине. Определение общих остатков 12 бета-агонистов, таких как мабутерол, бамбутерол, циматерол и фенотерол. Минимальный предел обнаружения метода в настоящем документе: минимальный предел обнаружения общего количества остатков 12 препаратов-агонистов β-рецепторов в свинине, говядине и баранине составляет 1 мкг/кг. 2Нормативно-справочные документыСодержание следующих документов составляет существенные положения настоящего документа посредством нормативных ссылок в тексте. Среди них для датированных ссылок к настоящему документу применяется только версия, соответствующая дате; для недатированных ссылок к настоящему документу применяется последняя версия (включая все поправки). GB/T6682Характеристики лабораторной воды для анализа и методы испытанийGB/T33411Общие принципы набора для иммуноферментного анализа3Принцип применения метода непрямой конкуренцииELISA, на полоске микролунки, покрытой антигена кленбутерола, оставшиеся препараты-агонисты β-рецепторов в образце конкурируют с антигеном кленбутерола на планшете для микротитрования за антитела к кленбутеролу, и после добавления антитела, меченного ферментом, окрашивается реагент для проявления цвета и остановки раствора для прекращения реакции. С помощью устройства для считывания микропланшетов измерьте поглощение при 450 нм, причем значение поглощения отрицательно коррелирует с общим количеством 12 остатков лекарства-агониста β-рецептора, которое можно получить путем сравнения со стандартом. ;кривая 12Остаточные количества бета-агонистов. T/SDAA0054-20214Реагенты или материалыВ реагентах, используемых ниже, если не указано иное, используются только реагенты аналитической чистоты4.1вода, GB/T6682, класс III. 4.2 Гидроксид натрия (NaOH) 4,3 Трихлоруксусная кислота (C2HCl3O2) 4,4 Раствор гидроксида натрия: C(NaOH) = 1 моль/л, вес гидроксида натрия (4,2) 40,0 г , добавьте воду для растворения и доведите объем до 1000 мл. 4,5 Раствор трихлоруксусной кислоты: C(C2HCl3O2)=10 г/л, отвесить 10,0 г трихлоруксусной кислоты (4.3), добавить 1000 мл воды до растворения, хорошо встряхнуть. . 4.6Набор для обнаружения β-агонистовХранить при температуре 2℃~8℃. 4.6.1 Характеристики 96-луночного планшета, покрытого антигеном кленбутерола, составляют 12 полосок × 8 лунок. 4.6.2Рабочий раствор антител к кленбутеролу4.6.3Рабочий раствор с ферментной меткой4.6.420Концентрированный промывной раствор4.6.5Раствор субстратаA4.6.6Субстрат Электронное решениеB Раствор 4.6.7 Стоп-раствор 4.6.8 Стандартный раствор серии Кленбутерол 6 Градиенты концентрации, концентрации 0 мкг/л, 0,2 мкг/л, 0,6 мкг/л, 1,8 мкг/л, 5,4 мкг/л , 16,2 мкг/л. 4.6.9 Промывной рабочий раствор. Разбавьте 20-кратно концентрированный промывной раствор водой в соответствии с объемным соотношением 1:19), используемый для промывки ферментных целевых пластин. Хранить при температуре 2℃~8℃, действителен в течение 1 месяца. 4.6.10 раствор субстрата a, b смешанный раствор substrate solution a раствор, раствор субстрата b раствор по объему 1: 1 перемешиваем смесь. 5Приборы5.1считыватель ИФАоснащен450нмфильтром. 5.2 Микропипетка Одноканальная 20 мкл ~ 200 мкл, 200 мкл ~ 1000 мкл Микропипетка, 8 каналов 50 мкл ~ 300 мкл sp;мклпипетка для микроколичеств. 5.3 Гомогенизатор Скорость вращения 10000 об/мин ~ 15000 об/мин. T/SDAA0054-20215,4Микрошейкерподходит для96планшетов. 5.5 Вихревой смеситель 5.6 Баланс Чувствительная способность составляет 0,01 г. 5,7 Скорость центрифуги ≥4000 об/мин. 6. Подготовка проб. Образцы хранят в холодильнике при температуре -20°C. Возьмите свежую или размороженную холостую пробу, разрежьте ее на части, поместите в гомогенизатор и гомогенизируйте на высокой скорости 10000 об/мин~15000 об/мин в течение 1 минуты. 7 Этапы анализа 7.1 Обработка образца Взвесьте образец 2 г ± 0,01 г в центрифужную пробирку объемом 50 мл, добавьте 4 мл раствора трихлоруксусной кислоты (4). .5) , полностью перемешать; 4000 об/мин центрифуга 5 мин; взять 1 мл супернатанта в новую центрифужную пробирку, добавить 30 мкл раствора гидроксида натрия (4.4), перемешать на вортексе 10 с. перемешать; Центрифуга 4000 об/мин, 5 мин, взятие 50 мкл супернатанта для детекции. Коэффициент разбавления составляет 2 раза. 7.2Этапы определенияПоместите набор при комнатной температуре (19℃~25℃) перед использованием1ч~2ч. 7.2.1 В соответствии с расчетом не менее двух параллельных экспериментов для каждого стандартного раствора и раствора образца вставьте необходимое количество полосок ферментных меток в держатель планшета и запишите положения каждого стандартного раствора и испытуемого раствора. 7.2.2 Добавляют по 50 мкл каждого стандартного раствора (4.6.8) или раствора образца в каждую микролунку. 7.2.2 Добавьте 50 мкл рабочего раствора антитела (4.6.2) в каждую микролунку, тщательно перемешайте и проведите реакцию при комнатной температуре (25°С±2°С) в темноте 15 мин. 7.2.3 Выливают жидкость в лунки, добавляют в каждую лунку по 260 мкл промывного рабочего раствора (4.6.9), полностью промывают 4 раза, каждое замачивание 15 с~30 с. 7.2.4 Слейте жидкость из лунок планшета, поместите планшет для ИФА вверх дном на впитывающую бумагу и высушите, сразу же добавьте 100 мкл рабочего раствора ферментного маркера (4.6.3) в каждую лунку, хорошо перемешайте. и реагируют в темноте в течение 15 мин при комнатной температуре (25°C±2°C). 7.2.5 Повторите этап 7.2.3; 7.2.6 Немедленно добавьте 100 мкл смеси субстрата A, B (4.6.10) в каждую лунку, хорошо перемешайте Равномерно, при комнатной температуре ( 25℃±2℃)темновая реакция15мин~20мин. 7.2.7 Добавьте 50 мкл стоп-раствора (4.6.7) в каждую лунку и тщательно перемешайте; Измерьте поглощение. T/SDAA0054-20217.3Бланковый тестВозьмите бланк, входящий в комплект, и выполните шаги 7.2измерения. 7.4Испытание контроля качестваДля каждого измерения должна быть изготовлена 1одна проба для контроля качества с холостой пробой, к которой добавлен стандартный раствор. 8Расчет и выражение результатов8.1Относительное значение поглощенияРассчитывают, используя отношение значения поглощения стандартного раствора и раствора образца к значению поглощения контрольного раствора, см. формулу (1): Ar=BB0×100%…………………(1)В формуле: Ar – значение относительной оптической плотности, %; B – среднее значение оптической плотности стандарта (или образца ) раствор; ;B0 – среднее значение оптической плотности бланка. В результате расчета сохраняются 3 значащие цифры. 8.2Постройте стандартную кривую, используя относительное значение оптической плотности (%) по оси ординат и натуральный логарифм каждой концентрации стандартного раствора (мкг/л) по оси абсцисс, нарисуйте стандартную кривую по полулогарифмической координате. . Для каждого теста необходимо построить новую стандартную кривую. 8.3Расчет результата пробыОбщее количество остатков лекарственного средства-агониста β-рецепторов в пробе обозначается символомX, а значение выражается в микрограммах на килограмм (мкг/кг), рассчитывается по формуле (2 ): X=C×n……………(2)В формуле:С - концентрация лекарственного препарата в растворе пробы из Чада на стандартной кривой, ед. – микрограмм на литр (мкг/л); n – коэффициент разбавления пробы. В результатах расчета сохраняются три значащие цифры. T/SDAA0054-20219.Перекрестная реактивностьКленбутерол: 100%. Преналин: 141%, Тобутерол: 80%, Бробутерол, Мапентерол: 107%, Сибутерол: 86,9%. Альбутерол: 60,6%. Мабутеро: 56,3%. Тербуталин: 33,1%. Бамбутеро: 18%. Чиматро: 14%. Фенотерол: 10,6%. 10. Прецизионность 10.1 Чувствительность Предел обнаружения этого метода для общего количества остатков препарата-агониста β-рецепторов в образцах свинины, говядины и баранины составляет 1 мкг/кг. 10.2 Точность Степень извлечения по этому методу составляет 60%～120% при добавленной концентрации 1мкг/кг～10мкг/кг. 10.3 Точность Коэффициент вариации внутри анализа этого метода составляет ≤20%, а коэффициент вариации между анализами составляет ≤30%.

T/SDAA 0054-2021 История

• 2021 T/SDAA 0054-2021 Технический код остатков 12 видов β-агонистов в пищевых продуктах животного происхождения. Иммуноферментный анализ.