Требования к производственной площадке 4.1.1 Основные требования Окружающая среда должна быть чистой и опрятной, с хорошим воздухом, хорошей вентиляцией, достаточным количеством источников воды и соответствовать стандартам гигиены питьевой воды GB5749, плавным дренажем, достаточным электроснабжением и удобной транспортировкой. 4.1.2 Санитарно-гигиенические требования должны соответствовать положениям Технического регламента NY/T528 по производству съедобных грибов. Производственные помещения и оборудование 4.2.1 Расположение и планировка производственного здания должны соответствовать положениям Технического регламента NY/T528 по производству съедобных грибов. 4.2.2 Помещение для ферментации должно быть построено в соответствии со спецификациями проектирования чистых заводских зданий GB50073. Пол должен быть водонепроницаемым, антикоррозийным, непротечным, противоскользящим и легко чистящимся. Уклон дренажа должен составлять 1%- 1,5%.Дренажная канава должна представлять собой открытую канаву из нержавеющей стали дугообразной формы;Углы стен должны быть закруглены, а стены и потолок должны быть влагонепроницаемыми, устойчивыми к плесени, водонепроницаемыми и легко чистящимися. 4.2.3 Помещение для инокуляции должно быть построено в соответствии со спецификациями проекта чистого цеха GB50073. В помещении для инокуляции жидким штаммом должна быть оборудована буферная комната, у входа должны быть установлены мытье рук, а в помещении должны быть установлены закрытые контейнеры для мусора. в цехе должны быть установлены вытяжные трубы или вентиляционное оборудование, а двери и окна должны быть оборудованы защитной сеткой от комаров и мух. 4.2.4 Основные инструменты и оборудование должны быть оснащены оборудованием для очистки воды, инкубатором для жидких культур, воздушным компрессором, воздушным фильтром, инокулятором для жидких культур, паровым стерилизатором высокого давления, паровым котлом, рабочим столом для очистки, инкубатором с постоянной температурой, шейкером с постоянной температурой, холодильник, микроскоп, магнитная мешалка, весы, весы, ацидиметр и т. д. В местах с частыми перебоями в подаче электроэнергии следует предусмотреть собственный источник питания (генератор). 4.2.5 Основное производственное оборудование должно быть оснащено обычными биологическими лабораторными материалами, такими как стеклянные колбы Эрленмейера, инокуляционные машины, пробирки, мерные стаканчики и мерные цилиндры, стеклянные воронки, чашки Петри, фильтровальная бумага для количественного и качественного анализа, прецизионная бумага для определения pH, и т. д. Сырье культурального субстрата должно соответствовать техническим требованиям безопасности NY5099, экологически чистым субстратам для выращивания пищевых продуктов и съедобных грибов. Производственные сорта 4.4.1 Отбирать сорта черного гриба с высокой урожайностью, высоким качеством, сильной стрессоустойчивостью и хорошими коммерческими свойствами, использовать сорта, зарегистрированные Комитетом по утверждению сортов культур на провинциальном уровне или выше, и вводить семена из семенных пунктов с соответствующими техническими характеристиками. квалификации и иметь хорошую коммерческую недвижимость. 4.4.2 Процесс производства штамма должен соответствовать требованиям Технического регламента производства продуктов съедобных грибов NY/T528. 5 Процесс производства жидкого штамма 5.1 Технологическая схема 5.2.1 В контейнере используются стеклянные пробирки размером 18*180 мм или 20*200 мм, пробирки следует содержать в чистоте и сухости. 5.2.2 Формула среды Среда с картофельно-декстрозным агаром (сокращенно среда PDA): 200 г картофеля, 20 г глюкозы, 20 г агара, 1000 мл воды, естественное значение pH. Комплексная картофельно-декстрозная агаровая среда (среда CPDA): 200 г картофеля, 20 г глюкозы, 2 г дигидрофосфата калия, 0,5 г сульфата магния, 20 г агара, 1000 мл воды, естественное значение pH. 5.2.3 Стерилизация: Стерилизация паром высокого давления при 121°C и давлении 0,11 МПа в течение 30 минут. 5.2.4. Инокуляцию следует проводить строго в соответствии с асептическим режимом на сверхчистом рабочем столе. После завершения инокуляции укажите на пробирке название штамма и время инокуляции. 5.2.5. Культура. В соответствии с потребностями роста штамма черного гриба обеспечьте температуру культивирования 24–25 °C, поддерживайте относительную влажность воздуха 65–75 % и избегайте света при культивировании. 5.2.6 Образцы сохраненных бактериальных штаммов следует сохранять для дальнейшего использования, а количество сохраняемых образцов должно составлять 3 штамма материнского штамма на партию. Хранить при температуре 4–6 °C до появления первого прилива бактерий из этой партии. Приготовление жидких штаммов во встряхиваемой колбе. 5.3.1. Контейнер должен представлять собой обычную колбу Эрленмейера емкостью 1000 мл, которую следует содержать в чистоте и сухости. 5.3.2 Средняя формула включает 3% глюкозы, 2% соевого шрота, 1% кукурузной муки, дрожжевой порошок, 0,1% дигидрофосфата калия, 0,2% карбоната кальция, 0,05% сульфата магния и естественное значение pH. Растворимый крахмал 3-6%, сахароза 1%, дигидрофосфат калия 0,3%, сульфат магния 0,15%, дрожжевой экстракт 0,1%, естественное значение pH. 5.3.3 Приготовление культуральной среды во встряхиваемой колбе. Взвесьте сырье в соответствии с формулой культуральной среды в встряхиваемой колбе. Сначала взвесьте порошок бобового жмыха и кукурузную муку, смешайте их, оберните четырьмя слоями марли и плотно завяжите. Кипятите в кипятка на 20 минут, достаньте, процедите через четыре слоя марли, доведите до объема и добавьте оставшиеся ингредиенты до растворения. 5.3.4 Объем заполнения: Приготовленную питательную среду поместите в колбу Эрленмейера объемом 400 мл и закройте ее силиконовой пробкой. 5.3.5 Стерилизация аналогична 5.2.3 методу стерилизации паром под высоким давлением. 5.3.6 Инокуляция: Охладите стерилизованный флакон с культуральной средой до температуры ниже 30°C и поместите семена во встряхиваемую колбу на сверхчистом рабочем столе. После плановой дезинфекции сверхчистого рабочего стола вставьте наклонное исходное семя 3 площадью 0,5 см2 в каждого флакона на поверхности жидкости.Блок ~ 5 штук.Штамп-блок содержит как можно меньше культуральной среды, так, чтобы мицелиальная сторона была обращена вверх.Штамп-блок должен плавать на поверхности жидкости.После завершения инокуляции вставьте вилку силиконовая заглушка. 5.3.7 Культура: Поместите инокулированную колбу Эрленмейера в инкубатор с температурой 25°C для статической культуры на 2–3 дня. Когда инокулированный блок вырастет до 1 см на поверхности культуральной жидкости, поместите колбу Эрленмейера в ротационную печь при 140 об/мин. Встряхните культуру на шейкере и культивируйте ее в течение 7 дней при температуре культуры 25°C, относительной влажности воздуха от 65% до 75% и защите от света, а затем приготовьте жидкий штамм во встряхиваемой колбе. Приготовление специальных материнских штаммов для жидких штаммов 5.4.1 Контейнер должен представлять собой обычную колбу Эрленмейера емкостью 500 мл. Колбу Эрленмейера следует хранить чистой и сухой. 5.4.2 Специальная формула материнских семян включает 77 % опилок, 20 % отрубей, 2 % коричневого сахара, 1 % гипса, ингредиенты: вода = 1:1,3, естественное значение pH. Примечание. Для просеивания различных опилок и отрубей используйте сито с ячейками 20, а также используйте просеянные мелкие опилки и отруби. 5.4.3 Приготовление специальной маточной питательной среды: Взвешивают сырье в соответствии с рецептурой специальной маточной питательной среды, равномерно перемешивают каждый компонент всухую, затем добавляют воду и несколько раз перемешивают до однородного состояния. 5.4.4 Объем заполнения: Поместите подготовленную специальную маточную культуральную среду в треугольную колбу емкостью 500 мл. Поверхность материала должна быть выровнена и уплотнена. Объем наполнения каждой бутылки составляет 450 мл. Протрите горлышко бутылки и закройте ее силиконовой пробкой. . 5.4.5 Стерилизация Поместите заполненную колбу Эрленмейера в скороварку для стерилизации.Начните отсчет времени, когда температура достигнет 121°С и давление 0,15 МПа, и поддерживайте в течение 90 минут. Перед использованием подождите, пока температура внутри флакона не упадет ниже 30°C. 5.4.6. Инокулируйте на сверхчистом рабочем месте, используя стерилизованную соломинку, соедините жидкий штамм во встряхиваемой колбе со стерилизованной специальной материнской культуральной средой с объемом инокуляции 10 мл/флакон. После завершения инокуляции укажите на пробирке название сорта и время инокуляции. 5.4.7 Метод культивирования аналогичен методу 5.2.5 культивирования черного гриба. Мицелий готов, когда он наполнится. 5.4.8 В настоящее время хранение специальных материнских семян, покрытых мицелием, не используется. Их можно хранить в холодильнике при температуре 4℃-6℃ в течение трех месяцев для обеспечения легкого доступа в любое время. Осмотр и очистка бродильного резервуара 5.5.1 Осмотрите все клапаны, предохранительные клапаны, манометры, уплотнения и трубопроводы на резервуаре, чтобы убедиться, что они целы и работают правильно. 5.5.2 Очистка: Промойте резервуар изнутри и снаружи, а также все клапаны проточной водой, чтобы убедиться в отсутствии мертвых углов и остатков культурального материала на внутренней стенке. 5.5.3 Бак с культурой, стерилизованный воздухом, должен подвергаться воздушной стерилизации при первом использовании, контаминации бактериями, длительном хранении или при смене сорта. Для инкубаторов со встроенными электрическими нагревательными стержнями добавьте воду до 80% объема, нагрейте до 121°C и стерилизуйте 40 минут. В инкубаторах, стерилизованных внешним паром, давление пара достигает 0,11–0,12 МПа, температура 121–124 ℃, а время стерилизации составляет 40 минут. Рецептура жидкой питательной среды: 10 % картофель; 1,5 % коричневый сахар; 1 % глюкоза; 4 % отруби; 0,2 % пептон; 0,2 % дигидрофосфат калия; 0,1 % сульфат магния; VB1: 10 мг/л; 0,03 % рассол. Приготовление жидкой питательной среды: Взвесьте сырье согласно рецептуре жидкой питательной среды.Сначала взвесьте отруби, проварите их в кипящей воде в течение 20 минут, отфильтруйте отруби через четыре слоя марли, затем добавьте картофель и варите. Процедите через марлю и добавьте оставшиеся ингредиенты до полного растворения. Подача и настройка объема: откройте крышку инкубатора для подачи, добавьте необходимое количество воды в приготовленную среду, равномерно перемешайте, вылейте ее в инкубатор, добавьте воды, чтобы установить объем, объем подачи среды составляет 70% от объема. общий объем бака - 80%, затем закрутите загрузочную крышку. Инкубатор фактически открывает паровой клапан для нагрева промежуточного и внутреннего слоя инкубатора.Когда давление достигнет 0,05МПа, откройте выпускной клапан инкубатора для выпуска холодного воздуха.Когда выделившийся пар станет прямым, закройте выпускной клапан. Начинайте отсчет времени, когда давление пара в инкубаторе достигнет 0,11–0,12 МПа, а температура культуры достигнет 123 ° C. После поддержания ее в течение 40 минут закройте впускной клапан пара и откройте выпускной клапан инкубатора, чтобы давление в инкубаторе медленно упало ( давление в инкубаторе не может упасть) ноль), стерилизация инкубатора на этом этапе завершается. Примечание. Инкубатор необходимо разгружать в начале отсчета времени, в середине и в конце стерилизации. Слегка откройте инокуляционный клапан до тех пор, пока не выйдет небольшое количество воздуха и материала. Время разрядки каждый раз составляет 3-5 минут, а общий объем разгрузки составляет 3-5 л три раза. Охлаждение и охлаждение Охлаждение среды – это процесс снижения температуры среды после стерилизации со 123°С до 25°С. Включите переключатель холодной воды и используйте циркулирующую охлаждающую воду для охлаждения. После последней выгрузки культурального материала для стерилизации слегка откройте воздухозаборник инкубатора, запустите воздушный компрессор и действуйте медленно, чтобы стерильный воздух, ранее прошедший через фильтр, попал в инкубатор. Управляйте выпускным клапаном инкубатора, чтобы контролировать давление в инкубаторе на уровне 0,04 МПа, чтобы создать давление в инкубаторе, поддерживать отрицательное давление в инкубаторе и как можно скорее охладить культуральную среду до температуры ниже 30 ° C. Для специальных семян используйте треугольную колбу емкостью 1000 мл, вмещающую 750 мл воды, и стерилизуйте ее в условиях высокого давления 121–126 °C в течение 40 минут. Когда температура воды упадет ниже 30 °C, поместите специальную семя на чистом рабочем столе без разминания. Разомните его в бактериальных условиях и перелейте в бутылку со стерильной водой, чтобы получилась бактериальная суспензия. Для прививки обмотайте марлю проволокой с ручкой, внутренний диаметр которой немного больше прививочного порта, обмакните ее в 95%-ный спирт, наложите на прививочный порт и подожгите. Закрыть впускной клапан культурального бака и открыть выпускной клапан культурального бака.Когда давление культурального бака упадет ниже 0,01МПа, открыть пробку флакона с бактериальной суспензией, горлышко флакона прожечь на огне в течение 30-40 с. секунд, откройте крышку порта для прививки и удалите бактерии. Быстро вылейте суспензию в банку, быстро закройте порт для прививки и затяните его. Снимите огненное кольцо и потушите его влажной тряпкой. Откройте впускной клапан для подачи свежего воздуха в бак. После инокуляции жидкого штамма культуры слегка откройте выпускной клапан и поднимите его до 0,02–0,04 МПа и проверьте температуру культуры и поток воздуха.Температура культуры устанавливается на уровне 25°C, объем вентиляции 6 л/мин и вентиляция. давление 0,06МПа. Время культивирования большинства сортов черного гриба составляет 72–96 часов. Через 24 часа после инокуляции образцы можно брать из порта для инокуляции каждые 12 часов, чтобы наблюдать за прорастанием и ростом бактерий. Сохранение и тестирование проб 5.14.1 Сохранение проб жидких штаммов из встряхиваемых колб; пустые образцы культуральной среды после стерилизации инкубатора; пробы, регулярно извлекаемые из инкубатора в процессе культивирования, используются для микроскопического исследования и определения других физических и химических показателей. . Вышеуказанные образцы следует хранить в холодильнике при температуре 4°C более одной недели. 5.14.2 Для проверки стерильности вышеупомянутые сохраненные образцы следует наносить штрихами на чашку с агаром для проверки стерильности и культивировать при постоянной температуре 28°С в течение 2-5 дней. Рост колоний следует наблюдать каждый день. На ослабленной линии не должно быть колоний бактерий, плесени или дрожжей, что указывает на отсутствие бактерий в образце. Сохраненные образцы следует исследовать под микроскопом сразу после отбора проб, чтобы определить статус роста и развития мицелия, а также наличие какого-либо загрязнения различными бактериями. Индикаторы для помещения жидких штаммов в банки. 5.15.1 После того, как качество подтверждено микроскопическим исследованием и другими физическими и химическими показателями, их можно инокулировать светом. Температуру культуры доводили до 24°C-26°C. 5.15.2 Органолептические показатели приведены в таблице 1. Показатели объекта: Цвет бактериальной жидкости - белый, шаровидный мицелий - белый, фильтрат - коричневый. Бактериальная жидкость слегка вязкая, с большим количеством хлопьевидных или шаровидный мицелий взвешен, равномерно распределен, не быстро расслаивается, бактериальная жидкость не мутная. Запах бактериальной жидкости имеет уникальный аромат жидкой культуральной жидкости съедобных грибов, без какого-либо специфического запаха, молочной кислоты, запаха и т. д. Запах из выпускного отверстия инкубатора является нормальным и не имеет явных изменений. Таблица 1 Сенсорные показатели 5.15.3 Физико-химические показатели приведены в Таблице 2 Таблица 2 Физико-химические показатели Показатели позиции Значение pH находится в пределах нормы для данного сорта Влажный вес мицелия (г/100 мл) >8 Морфология мицелия и идентификация различных бактерий под микроскопом можно увидеть съедобные грибы. Этот вид жидкой питательной среды имеет уникальную форму гиф, с большим количеством сферических и плотных распределенных гиф, толстыми гифами, равномерным распределением протоплазмы внутри гиф и глубокой окраской красителей, отсутствие плесени. гифы, дрожжевые и бактериальные клетки. Проверка на стерильность сохранившихся образцов показала рост гифов съедобных грибов, а в царапинах не было роста плесени, дрожжей или колоний бактерий. Хранение 5.16.1 Метод хранения жидких штаммов в шейкерах.Жидкие штаммы в шейкерах следует завернуть в крафт-бумагу и хранить при температуре 4°С в течение 5–7 дней. 5.16.2 Способ хранения жидких штаммов в культуральных резервуарах: Культуральный резервуар можно хранить при комнатной температуре 15–20 ℃ в течение 1–2 дней.
T/SYJ 0002-2023 История
2023T/SYJ 0002-2023 Технический регламент на производство жидких штаммов синьцзянского черного гриба