T/GDCA 006-2021
Косметические ингредиенты - метод тестирования ингибирования активности тирозиназы (in vitro) (Англоязычная версия)

Стандартный №

T/GDCA 006-2021

язык

Китайский, Доступно на английском

Дата публикации

2021

Разместил

Group Standards of the People's Republic of China

Последняя версия

T/GDCA 006-2021

сфера применения

1. Экспериментальный метод. Если не указано иное, концентрация испытуемого образца, упомянутая в этом документе, относится к концентрации на момент его приготовления. 1.1 Обработка тестируемого вещества Койевую кислоту положительного контроля разбавляют буфером PBS до: 0,080 г/л, 0,040 г/л, 0,020 г/л, 0,010 г/л, 0,008 г/л, Серия растворов с градиентом массовой концентрации 0,005 г/л, 0,002 г/л, 0,001 г/л. Обработка тестируемого вещества: Тестируемое вещество разбавляли буфером PBS с образованием более 5 растворов образцов с подходящими массовыми концентрациями. 1.2 Испытуемая группа размещается на 96-луночном ферментном планшете с лунками для фона растворителя (Ta), лунками для реакции с растворителем (Tb), лунками для фона для образцов (Tc) и лунками для реакции для образцов (Td). Среди них группа Ta представляет собой фоновую группу растворителя без добавления раствора субстрата L-тирозина и без раствора образца; Группа Tb представляет собой реакционную группу растворителя с добавлением раствора субстрата L-тирозина, но без добавления раствора образца; Группа Tc Это фон образца группа без добавления раствора субстрата L-тирозина и добавления раствора образца; группа Td представляет собой реакционную группу образца, добавляющую как раствор субстрата L-тирозина, так и раствор образца. Сделайте по три одинаковых отверстия в каждой группе. 1.3. Процедура испытания относится к количеству добавленного реагента, указанному в таблице 1. Добавьте раствор L-тирозина, раствор образца/растворитель и буфер PBS в каждую лунку последовательно, тщательно перемешайте и инкубируйте в среде с постоянной температурой 37°C. в течение 10 мин. Добавьте по 20 мкл раствора тирозиназы в каждую лунку поочередно, хорошо перемешайте при 37°С в течение 5 мин ± 5 с, затем сразу же поместите в микропланшет-ридер и измерьте при длине волны 475 нм. Примечание. Выдерживайте одинаковое время (5 мин ± 5 с) для каждой лунки от добавления раствора тирозиназы до измерения оптической плотности. 2. Расчет результата 2.1 Скорость ингибирования активности тирозиназы 2.2 Половинная ингибирующая концентрация (значение IC50) Принимая концентрацию тестируемого образца за абсциссу, соответствующая степень ингибирования тирозиназы представляет собой ординату, нарисуйте кривую и подгоните ее. уравнение регрессии (R2≥0,9). В соответствии с уравнением регрессии рассчитайте концентрацию образца, соответствующую степени ингибирования тирозиназы 50%, что является значением IC50 тестируемого образца, и рассчитайте его 95% доверительный интервал. 2.3 Эквивалент койевой кислоты 3. Проверка эффективности теста К каждой серии экспериментов необходимо добавить тест положительного контроля. IC50 положительного контроля койевой кислоты должен находиться в пределах от 0,005 г/л до 0,03 г/л. Тест-система считается валидной. Значение стандартного отклонения (стандартное отклонение, SD) между скоростями ингибирования среди параллельных лунок каждой группы должно составлять ≤ 15%, тогда параллелизм теста считается действительным. Добавьте раствор тирозиназы, перемешайте при 37°C в течение 5 мин ± 5 с, сразу же поместите его в устройство для считывания микропланшетов и измерьте при длине волны 475 нм: влияние времени ± 5 с на IC50 результатов теста, стандартное отклонение Значение SD ≤ 3%. 4. Определение результата. Степень ингибирования тирозиназы образца при определенной тестируемой концентрации должна быть выражена как: среднее значение скорости ингибирования ± стандартное отклонение (SD) скорости ингибирования. Сравните ингибирующую способность различных образцов к тирозиназе. При одинаковой тестируемой концентрации, чем выше скорость ингибирования, тем сильнее ингибирующая способность образца к тирозиназе. Сравнивали ингибирующую тирозиназу способность различных образцов, и чем меньше значение IC50, тем сильнее была ингибирующая тирозиназу способность образца. Сравнивали ингибирующую тирозиназу способность различных образцов, и чем меньше значение эквивалента койевой кислоты, тем сильнее была ингибирующая тирозиназу способность образца.

T/GDCA 006-2021 История

• 2021 T/GDCA 006-2021 Косметические ингредиенты - метод тестирования ингибирования активности тирозиназы (in vitro)